PCR仪扩增注意点和详细过程

PCR仪扩增需要掌控的温度：
将PCR反应体系升温至95℃左右，双链的DNA模板就解开成两条单链，此过程为变性。然后将温度降至引物的Km值以下，3'端与5'端的引物各自与两条单链DNA模板的互补区域结合，此过程称为退火。当将反应体系的温度升至70℃左右时，耐热的TaqDNA聚合酶催化四种脱氧核糖核苷酸按照模板DNA的核苷酸序列的互补方式依次加至引物的3'端，形成新生的DNA链。每一次循环使反应体系中的DNA分子数增加约一倍。理论上循环几次，就增加为2^n倍。当经30次循环后，DNA产量达2^30拷贝，约为10^9个拷贝。由于实际上扩增效率达不到2倍，因而应为（1+R）^n，R为扩增效率。
PCR仪扩增过程的详细步骤：
1、按PCR仪正面左下角电源开关，启动PCR仪。
2、把顶盖向上扳，再往前推，露出放样孔，PCR管放入前应加好反应体系各组分，再放入PCR仪离心管。反向重复这一步骤将顶盖板向后拉，盖好顶盖。
3、按F2“Create”新建一个扩增的PCR程序。
4、按控制台面右方上下左右方向键，可随意移动编辑位置，输入需要的温度、时间、循环数等。
5、在“Reactionvolume”后输入相应数值，有Std“1～100ul”和9600“1~50ul”两档可供选择。
6、按F1“Start”启动，之后按“INFO”对应键查看PCR仪结束键。
7、扩增完成后按台面左方“Stop”键退出。

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