稳定细胞株构建

     稳定细胞株构建
     细胞株最初为W.Earle所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，把其建立的人体宫颈癌细胞Hela系称为“株”。
     构建稳定细胞株的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。细胞株最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素、潮霉素和嘌呤霉素，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
     慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
     从一个经过生物学鉴定的细胞株或原代培养物用单细胞分离培养或通过筛选的方法，克隆具有特殊性质或标志的单细胞获得的细胞群，称细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。描述一个细胞株时，必须说明它的特殊性质或标志。与细胞系类似，如果不能继续传代或传代代数有限，可称为“有限细胞株”。动物细胞培养技术发展很快，如干细胞的培养和应用、基因工程细胞的培养和应用、组织细胞的培养和应用、单克隆抗体的制备等技术已成为生物技术发展的强大动力。
 

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